隨著PCR技術(shù)的發(fā)展與廣泛應(yīng)用，利用PCR的定量技術(shù)也取得了長足的發(fā)展。早期主要采用外參照的定量PCR方法，這種方法因影響因素較多，現(xiàn)已逐漸被內(nèi)參照物定量方法和競爭PCR定量方法所取代，并在此基礎(chǔ)上發(fā)展了熒光定量
PCR儀方法，使PCR定量技術(shù)提升到新的水平。
分子信標技術(shù)也是在同一探針的兩末端分別標記熒光分子和猝滅分子。通常，分子信標探針長約25核苷酸，空間上呈莖環(huán)結(jié)構(gòu)。與TaqMan探針不同的是，分子信標探針的5'和3'末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，此時熒光分子和猝滅分子鄰近，因此不會產(chǎn)生熒光。當溶液中有特異模板時，該探針與模板雜交，從而使探針的發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開，于是溶液便產(chǎn)生熒光。熒光的強度與溶液中模板的量成正比，因此可用于PCR儀的定量分析。該方法的特點是采用非熒光染料作為猝滅分子，因此熒光本底低。
常用的熒光猝滅分子對是5'-（2'-氨乙基氨基萘-1-磺酸）（EDANS）和4'-（4'-二甲基氨基疊氮苯）苯甲酸（DAB-CYL），采用DAB-CYL作猝滅劑是由于它對多種熒光素都有很強的猝滅效率。當受到336nm紫外光激發(fā)時，EDANS發(fā)出波長為490nm的亮藍熒光；DAB-CYL的是非熒光分子，但其吸收光譜與EDANS的發(fā)射熒光光譜重疊。只有分子信標時，EDANS和DAB-CYL的距離非常接近，足以發(fā)生FRET，EDANS受激發(fā)產(chǎn)生的熒光轉(zhuǎn)移給DAB-CYL并以熱的形式散發(fā)，不能檢測到熒光；相反，當有靶核酸存在時才可檢測到熒光。
分子信標技術(shù)的不足之處是：
雜交時探針不能*與模板結(jié)合，因此穩(wěn)定性差；
探針合成時標記較復(fù)雜。分子信標技術(shù)結(jié)合不同的熒光標記，可用于基因多突變位點的同時分析。
您的位置：網(wǎng)站首頁 > 新聞資訊 > PCR儀有關(guān)的分子信標技術(shù)介紹 