Chromotek精品系列--源于羊駝的納米抗體

德國 ChromoTek 公司成立于2008年，致力于細胞生物學和蛋白質組學的研發(fā)與研究，公司擁有強大的研發(fā)團隊，有先進的生物制劑，主要主要使命是花費較少的時間和成本，使客戶獲得得高質量的實驗數(shù)據(jù)。
ChromoTek的產品分類：
一、Nano-Trap系列；以產品結合物為標準，包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列，還有96板系列；抗體結合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；
三、 可用于HCA 實驗的Chromobodies(質?；蚣毎敌问?；
四、  高品質抗體（標簽蛋白抗體和普通抗體）

由一個重鏈可變區(qū)組成的羊駝單域抗體，是目前可以得到的具 有完整功能的穩(wěn)定的可結合抗原的小單位。分子量僅15 kDa,是 常規(guī)IgG抗體分子量的1 /10。

分子量小

»分子量僅15 kDa,是傳統(tǒng)IgG抗體(150 kDa)的1 /10,或Fab片段(50 kDa)的1/3

»結構簡單穩(wěn)定，僅一個重鏈可變區(qū)，特異性強

應用廣泛

»免疫沉淀、免疫熒光、超分辨率成像、表面等離子體共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)、 switchSENSE 技術等

穏定性高

»熱穩(wěn)定性高，可常溫運輸

»化學穩(wěn)定性高，可忍受苛刻的緩沖及洗脫條件

多重驗證

»序列明確，結構清晰

»應用驗證

» SCI文獻引用

親和力高

»表位結合能力強，不受空間環(huán)境影響

»更高的組織穿透力

Y Nano-Traps

GFP-Trap —免疫沉淀伴侶

產品特色:

»結構穩(wěn)定——不會斷裂，無普通抗體輕鏈與重鏈污染

»性質穩(wěn)定——耐高溫，耐苛刻的孵育條件和洗脫條件

»親和力高——抓捕牢固不易脫落，可顯著縮短反應時間

應用領域：

» Immunoprecipitation (IP) / Co-IP

» Mass spectrometry (MS)

» Enzyme activity measurements

» ChIP, RIP, iCLIP 分析

識別GFP衍生物：

» AcGFP, Clover, eGFP, Emerald, GFP, GFP5, GFP Envy

GFP S65T, mGFP, mPhluorin, PA-GFP, Superfolder

GFP, TagGFP, TagGFP2, monomeric eGFP K206A

» YFP, Citrine, eCitrine, eYFP, Venus, Ypet

» CFP

» BFP

▲ GFP-Trap在免疫沉淀中抓取蛋白*
I: Input, FT: flow through (non-bound),
B: bound

Y Spot-Tag®

Spot-Tag® （序列PDRVRAVSHWSS）是基于Spot納米抗體的優(yōu)化試劑，用于多種捕獲和檢 測應用中。

優(yōu)勢

»通用肽標簽，適用范圍廣泛

»針對內源水平的標簽蛋白進行了優(yōu)化

»納米抗體技術實現(xiàn)高性能

Spot-Tag : PDRVRAVSHWSS

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Screened and mutated positions

應用

IP/Co-IP: Spot-Trap®

•單帶純化：下游應用中無輕鏈和重鏈

•高親和力，N端或C端融合的解離常數(shù)KD低至6-7 nM

• 65°C高穩(wěn)定性，可耐pH范圍4-10

•樹脂的結合能力2 1.4mg /ml （對于30 kDa的蛋白質）

IF/ WB: Spot-Label

偶聯(lián)ATTO594的抗Spot-Tag期米抗體

•更小的連接誤差,更好的組織穿透力

•成像性能優(yōu)異

-用于WB極度敏感

Protein purification: Spot-Cap

基于期米抗體的親和樹脂

•一步法純化蛋白

Nano-Boosters & Nano-Labels是一類熒光探針,通過將靶標蛋白的羊駝單域抗體VhH與熒光染料偶 聯(lián)在一起，Nano-Boosters能夠增強GFP、RFP等熒光蛋白的信號強度，Nano-Labels則能夠更準確的定 位到靶標蛋白位置。

優(yōu)勢

»增強熒光信號，成像效果更出眾

»熒光基團位移偏差小，定位更準確

»結構小巧且穩(wěn)定，通透性更佳

應用

»免疫熒光（IF）

»免疫細胞化學（ICC）

»免疫組織化學（IHC）

»組織透明三維成像（DISC。）

»超分辨顯微成像（SPM）

Nano-Caps是納米抗體/VhH偶聯(lián)的瓊脂糖珠,可以高效的進行一步法純化蛋白。

優(yōu)勢

» 一步法純化蛋白

»高結合力

»可重復使用

»洗脫溫和

應用

»蛋白純化

Chromobodies®是一種熒光納米探針，通過將羊駝單域抗體VhH與熒光蛋白的基因序列融合在一個重組 質粒來實現(xiàn)內源性靶標蛋白在活細胞內的可視化和實時分析。

優(yōu)勢

»結枸小巧穩(wěn)定，易于轉化表達

»活細胞成像，內源性靶標實時分析

»超分辨顯微成像，高通量分析

»不干擾內源性靶標蛋白功能

應用

»高通量分析(HCA)

»免疫熒光(IF)

»活細胞成像(Live cell)

»超分辨顯微成像(SPM)

?

Nanobodies / VhHs

GFP VhH 是否結合 protein A 或者 protein G ?

GFP VhH 結合 protein A 但不結合 protein Go

Nano-Traps

GFP-Trap®對于N端GFP融合管白和C端GFP融合蛋白在親和力上是否有差別？

GFP-Trap®對于C端GFP融合蛋白有稍微更高的親和力?？梢酝ㄟ^延長孵育時間（15-30min延長至l-2h）來補償這個差別。

能否用GFP-Trap®直接從組織樣品（例如位于變性緩沖液）中來純化帶GFP標簽的融合蛋白？

理論上來說GFP-Trap®在苛刻的緩沖液體系（例如含有0.1% SDS或者1M尿素的RIPA ）中恨穩(wěn)定。

洗脫的GFP-結合蛋白是否會與lg二抗發(fā)生交叉反應？

GFP-Trap®申的結合蛋白與山羊、小鼠、大鼠或者人的抗體沒有任何同源性，所以不會與lg二抗發(fā)生非特異性交叉反應。

GFP-Trap®的載量如何？

通常 GFP-Trap® Agarose 和 GFP-Trap® Magnetic Agarose 每 10 卩 L 懸浮液可以結合 8 卩 g GFP, GFP-Trap® Dynabeads 每 10 卩 L 懸浮液可以結合1 pgGFPo

Myc-Trap是否識別內源性的c-Myc蛋白？

我們尚未發(fā)現(xiàn)Myc-Trap可以識別內源性的c-Myc蛋白。由于在c-Myc蛋白的三維結構申對于結合Myc-Trap至關重要的一些抗 原表位被隱藏了，所以在非變性條件下a-Myc蛋白很難被Myc-Trap識別到。

如何將帶Myc標簽的融合蛋白從Myc-Trap上溫和的洗脫下來？

可以用lx或者2x Myc-peptide競爭性的洗脫。替代性的也可以用8M尿素或者pH2.5的0.2M甘氨酸室溫下洗脫。

Spot標簽該構建到目的蛋白N端還是C端？能否將Spot標簽插入到目的蛋白中間？

N端或者C端都能夠很好的識別。

對于Spot標簽插入到目的蛋白中間的得視情況而定。Spot標簽多肽需要以線性形式存在而且目的蛋白需要易進入不能有空間阻 礙。需要插入到足鋸大且無結構的環(huán)，或無固有結構的區(qū)域或較長的linker,才能鋸被Spot標簽抗體識別。

在還原狀態(tài)下該如何將帶Spot標簽的融合蛋白洗脫下來？

可以用Spot標簽多肽競爭性的洗脫，或者也可以用pH 1210mM NaOH洗脫（洗脫之后需立即調整pH ）。